Мониторинг синтеза РНК

Традиционный подход к мониторингу тотального синтеза РНК и, следовательно, клеточной пролиферации, основан на включении 5-Brom-уридина (5-BrU) во вновь синтезируемые цепи РНК клеточной РНК-полимеразой. Недостаток этого метода - разрушительная для клеток процедура детекции BrdU-специфичными антителами, требующая жестких условий проницаемости клеточной мембраны и процедуры денатурации нуклеиновых кислот.

Этот недостаток может быть обойден включением этинил-меченого уридина (5-EU^[1,2]) с последующей детекцией этинил-функционализированной РНК ковалентной коньюгацией с малоразмерными флуоресцентными азидами или азидами биотина (Рис.1)

5-EU-мечение тотальной РНК

• недеструктивно и потому пригодна для многостороннего анализа (нет резких условий для проницаемости мембраны и денатурации нуклеиновых кислот).
• обеспечивает значительно более быструю процедуру детекции (∼2 часа вместо более 4-х).
• совместимо с потоковой цитометрической микроскопией^[1,2]
• совместимо с разными клеточными линиями и организмами (клеточные линии и организмы, анализированные с помощью 5-EU)

Figure 1 Процесс мониторинга РНК синтеза с помощью 5-EU.

РНК