Посттрансляционная модификация - AMPylation

АМФилации (AMPylation) - недавно обнаруженная пост-трансляционная модификация, которая характеризуется ковалентной модификацией гидроксильных групп белка (серин, треонин или тирозин) аденилил 5ʹ-монофосфатом (AMP), катализируемой специфической АМФ трансферазой^[1,2].

Традиционный способ селективного мечения АМФилированных белков основан на сочетании радиоактивного мечения с ³²P-альфа-АТФ и целевой масс-спектрометрии.

Grammel et al.^[1] опубликовал нерадиоактивный вариант in vitro АМФилации, где Алкин-модифицированная АТФ (N⁶-propargyl-ATP/N⁶pATP) успешно используется для АМФилирования как очищенных белкво, так и белков в составе клеточных экстрактов.. Получившийся АМФилированный субстрат может быть впоследствие обработан в медь-катализируемой клик-реакции с целью:

• встроить Биотиновую группу для последующей очистки (используя Азид-Биотиновые, Алкин-Биотиновые or DBCO-содержащие биотинилирующие реагенты)
• для встраивания флуоресцентной группы для последующей визуализации (используя флуоресцентные Азиды, флуоресцентные Алкины, DBCO-содержащие флуоресцентные красители)

Рисунок 1 Процесс in vitro АМФилирования белков N⁶pATP (модифицированном соответственно [1]). Этап 1: Ферментативноен АМФилирование и одновременная этинил-функционализация белка-субстрата. Этап 2: Cu(I)- катализируемое мечение АМФилированного этинил-функционализированного белкового субстрата . Этап 3: Детекция при помощи A) гель-флуоресцентного анализа or B) масс-спектрометрии.

Посттрансляционная модификация белка