1. Каталог >
  2. Jena Bioscience >
  3. Клик-химия >
  4. По назначению (реагенты для клик-химии) >

Для клеточной биологии - Биосовместимые Пиколил-Азиды



Наиболее известной CLICK реакцией является Cu(I)- катализируемая реакция Азид - концевой Алкин (CuAAC) с использованием таких метаболитов, как 5-EdU, 5-EU или O-Пропаргил-пуромицин с последующей детекцией Азидными реагентами (Азиды флуоресцентных красителей, (Дестио)Биотинилированные Азиды или FLAG Азиды).

Но по причине токсичности Cu(I) использование реакции CuAAC в живых клетках является затруднительным. Эту проблему можно решить с использованием лигандов, хелатирующих Cu(I) таких как THPTA, которые служат двум целям: 1) Ускоряют реакции CuAAC, поддерживая степень окисления Cu(I) и 2) Защита биомолекул от окислительного повреждения.[1,2]

Пиколил-Азиды выводят рекацию CuACC на новый уровень биосовместимости и эффективности:[3,4,5]

  • они обладают медь-хелатирующей группой и потому требуют намного меньшей концентрации меди (≥ 10 µM) для достижения аналогичной эффективности реакции сравнительно с традиционными Азид-реагентами (≥ 100 µM) (Таблица. 1)
  • они значительно повышают эффективность мечения при использовании в классических условиях медь-катализируемой клик-рекации (100 µM CuSO4 + 500 µM THPTA)[3]


Таблица 1: Пиколил-Азиды требуют в 10 раз меньше меди для достижения эффективности традиционных Азид-реагентов.
R = Флюорофор, (Дестио)биотин или FLAG.


Азид[1,2] Пиколил-Азид[3]
Вспомогательный CuAAC реагент
CuSO4 100 µM – 250 µM[1,2] 10 µM – 100 µM[3]
THPTA 500 µM – 1.25 mM[1,2] 50 µM – 500 µM[3]
Аскорбат натрия 5 mM – 12.5 mM[1,2] 500 µM – 5 mM[3]
Соотношение CuSO4 : THPTA 1 : 5
Соотношение CuSO4 : Аскорбат натрия 1 : 50


Таблица 2: Пиколил-Азид реагенты. n/a: неприменимо; *: свободный краситель;

Label Exc.max*
[nm]
Em.max*
[nm]
Пиколил-Азид
Флуоресцентные красители
5/6-FAM 490 510 Picolyl-Azide-5/6-FAM
Sulfo-Cy3 553 566 Picolyl-Azide-Sulfo-Cy3
5/6-TAMRA 546 565 Picolyl-Azide-5/6-TAMRA
Sulfo-Cy5 647 663 Picolyl-Azide-Sulfo-Cy5
Cy7 553 566 Picolyl-Azide-Cy7
Биотинилированный реагент
Биотин n/a n/a Picolyl-Azide-PEG4-Biotin


Также вас могут заинтересовать алкин-модифицированные КЛИК-реагенты для работы с ДНК, тотальной РНК, поли(А) хвостом мРНК и мониторинга синтеза белка.


Литература:
[1] Presolski et al. (2011) Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Click Chemistry for Bioconjugation. Current Protocols in Chemical Biology 3:153.
[2] Hong et al. (2011) Analysis and Optimization of Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition for Bioconjugation. Angew. Chem. Int. Ed. 48:9879.
[3] Uttamapinant et al. (2012) Fast, Cell-Compatible Click Chemistry with Copper-Chelating Azides for Biomolecular Labeling. Angew. Chem. Int. Ed. 51:5852.
[4] Uttamapinant et al. (2013) Site-specific protein labeling using PRIME and chelation-assisted click chemistry. Nature Protocols 8:1620.
[5] Jiang et al. (2014) Monitoring Dynamic Glycosylation in Vivo Using Supersensitive Click Chemistry. Bioconjug. Chem. 25 (4):698.


Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой