1. Каталог >
  2. Реактивы, наборы >
  3. Виды реактивов >
  4. Клик-химия >
  5. Клик-химия по назначению >
  6. Клик-химия для Пост-Трансляционной модификации белков >

Посттрансляционная модификация - Фосфорилирование

... in Posttranslational Modification Analysis - Phosphorylation

γ-фосфат КЛИК-функционализированные АТФ аналоги: идентификация субстрата Киназы при нерадиоактивном in vitro фосфорилировании

Субстраты киназы обычно идентифицируют в in vitro фосфорилировании с радиоактивной ("hot") АТФ, чей модифицированный гамма-фосфат (32 или 33γP) передается киназой гидроксильной группе серина, треонина или тирозина в их белковом/пептидном субстрате.

Lee et al.[1] опубликовали нерадиоактивную версиюin vitro фосфорилирования. Азид- и Алкин-γP-модифицированные аналоги АТФ успешно использовались вместо 32γP-меченых АТФ для фосфорилазы p27kip1 с протеин киназой cdk2 (Рис. 1). Фосфорилированный субстрат был затем помечен Биотином или флуоресцентным красителем в КЛИК-реакции (Таб.1).
Click homepage
Рисунок 1: GST-меченый рекомбинантный p27kip1 инкубировался с киназой Cdk2 в присутствии одного из Азид/Алкин γP-меченых АТФ аналогов: : γ-[(Propargyl)-imido]-ATP (Cat. No. CLK-T11-1), γ-[(6-Azidohexyl)-imido]-ATP (Cat. No. CLK-T12-1) or γ-[2-Azidoethyl]-ATP (Cat. No. NU-1701). Фосфорилирование выявлялось иммуноблоттингом с фосфо-p27kip1 специфичными антителами[1].

Таблица 1 Алкин- и Азид-группы выявляются в клик-реакциях, соответственно, медь-катализируемых или без участия меди.

АТФ аналог Тип Клик-реакции Мечение с помощью
γ-[(Propargyl)-imido]-ATP Cu(I)-катализируемая Азиды флуоресцентных красителей
Азиды Биотина
γ-[(6-Azidohexyl)-imido]-ATPбез медиDBCO-содержащие флуоресцентные красители
DBCO-содержащий Биотин
γ-[2-Azidoethyl]-ATP


[1] Lee et al. (2009) Synthesis and reactivity of novel y-phosphate modified ATP analogues. Bioorg Med Chem Lett. 19:3804.

Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
1 mg pack CLK-T12-1 20018.34 руб. 1 mg



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
1 mg pack CLK-T11-1 20018.34 руб. 1 mg



Datasheet
НазваниеКодЦена Количество
L pack NU-1701L 45617.29 руб. 5 x 100 units
S pack NU-1701S 15573.06 руб. 100 Units




Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой