γ-фосфат КЛИК-функционализированные АТФ аналоги: идентификация субстрата Киназы при нерадиоактивном in vitro фосфорилировании
Субстраты киназы обычно идентифицируют в in vitro фосфорилировании с радиоактивной ("hot") АТФ, чей модифицированный гамма-фосфат (32 или 33γP) передается киназой гидроксильной группе серина, треонина или тирозина в их белковом/пептидном субстрате.
Lee et al.[1] опубликовали нерадиоактивную версиюin vitro фосфорилирования. Азид- и Алкин-γP-модифицированные аналоги АТФ успешно использовались вместо 32γP-меченых АТФ для фосфорилазы p27kip1 с протеин киназой cdk2 (Рис. 1). Фосфорилированный субстрат был затем помечен Биотином или флуоресцентным красителем в КЛИК-реакции (Таб.1).
Рисунок 1: GST-меченый рекомбинантный p27kip1 инкубировался с киназой Cdk2 в присутствии одного из Азид/Алкин γP-меченых АТФ аналогов: : γ-[(Propargyl)-imido]-ATP (Cat. No. CLK-T11-1), γ-[(6-Azidohexyl)-imido]-ATP (Cat. No. CLK-T12-1) or γ-[2-Azidoethyl]-ATP (Cat. No. NU-1701). Фосфорилирование выявлялось иммуноблоттингом с фосфо-p27kip1 специфичными антителами
[1].
Таблица 1 Алкин- и Азид-группы выявляются в клик-реакциях, соответственно, медь-катализируемых или без участия меди.
[1] Lee et al. (2009) Synthesis and reactivity of novel y-phosphate modified ATP analogues. Bioorg Med Chem Lett. 19:3804.
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| 1 mg pack |
CLK-T12-1 |
20018.34 руб. |
1 mg |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| 1 mg pack |
CLK-T11-1 |
20018.34 руб. |
1 mg |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Название | Код | Цена |
Количество |
| L pack |
NU-1701L |
45617.29 руб. |
5 x 100 units |
|
|
|
| S pack |
NU-1701S |
15573.06 руб. |
100 Units |
|
|
|
|
|
|
|
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
Datasheet
