1. Каталог >
  2. Jena Bioscience >
  3. Нуклеозиды, Нуклеотиды и их аналоги >
  4. Нуклеотиды >
  5. Нуклеотиды по применению >
  6. Белки / Ферменты >

Сигнальные системы Киназ - Нерадиоактивный анализ фосфорилирования белков

Nucleotides by Application  /  ... on Proteins/Enzymes  /  Kinase Signaling - Non-radioactive Protein Phosphorylation Analysis

В дополнение к традиционным методам анализа фосфорилирования белков (мечение радиоктивной "горячей" АТФ [1], фосфо-специфичными антитиелами [2] или замер истощения АТФ[3]) мы здесь обобщили последние тихники, использующие нерадиоактивно модифицированные АТФ аналоги, чей модифицированный гамма-фосфат может быть перемещен киназой ее пептидному/белковому субстрату in vitro.

Прямое мечение флуоресцентно меченой АТФ: Freeman et al.[4] Выполнение квантовых точек (QD) как оптических метод для FRET-анализа модельной системы казеин-киназы (CK2) / щелочной фосфатазы (ALP) (Рисунок1). ATTO590-меченая АТФ служит как донор фосфата для фосфорилирования субстратного пептида CK2

Нуклеотиды - Сигнальный механизм киназы, Рисунок 1
Непрямое мечение функционализированным аналогом АТФ: Lee et al.[5] Подготовка азид и алкин γ-модифицированных АТФ аналогов и тестирование их способности фосфорилировать p27kip1 с диким типом протеин-киназы cdk2. Фосфорилированный белок затем метится в клик-реакции, например, с флуоресцентными красителями (Рисунок 2):

Клик-реакцияНуклеотиды - Сигнальный механизм киназы, Рисунок 2


Allen et al.[6] описали катализируемое киназами тиофосфорилирование с ATPγS. Получившиеся меченые субстраты были распознаноы новыми тиофосфат-эфир-специфичными антителами.

Литература

[1] Lehel et al. (1997) A chemiluminescent microtiter plate assay for sensitive detection of protein kinase activity. Anal. Biochem. 244:340.
[2] Till et al. (1994) Use of synthetic peptide libraries and phosphopeptide-selective mass spectrometry to probe protein kinase substrate specificity. J. Biol. Chem. 269:7423.
[3] Kupcho et al. (2003) A homogeneous, nonradioactive high-throughput fluorogenic protein kinase assay. Anal. Biochem. 317:210.
[4] Freeman et al. (2010) Probing protein kinase (CK2) and alkaline phosphatase with CdSe/ZnS quantum dots. Nano Lett. 10:2192.
[5] Lee et al. (2009) Synthesis and reactivity of novel γ-phosphate modified ATP analogues. Bioorg. Med. Chem. Lett. 19:3804.
[6] Allen et al. (2007) A semisynthetic epitope for kinase substrates. Nature Methods 4 (6):511.

НазваниеКодЦена
1 mg pack CLK-T12-1 18274.47 руб. 1 mg



НазваниеКодЦена
1 mg pack CLK-T11-1 18274.47 руб. 1 mg



НазваниеКодЦена
L pack NU-1701L 41643.08 руб. 5 x 100 units
S pack NU-1701S 14216.27 руб. 100 Units



НазваниеКодЦена
NU-833-590 109016.64 руб. 30 µl
(1 mM)



НазваниеКодЦена
ATPγS, 25 mg pack NU-406-25 23189.67 руб. 25 mg
ATPγS, 5 mg pack NU-406-5 8192 руб. 5 mg
ATPγS, 50 mg pack NU-406-50 41968.26 руб. 50 mg




Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой