Винил-реагенты |
 |
Минимизация громоздкости метаболических меток имеет решающее значение для их применения как структурных меток1, и Виниловые группы действительно являются наименьшими возможными метками для био-независимого мечения (Схема 1). В сочетании с нашими тетразиновыми реагентами, винилированные уридин-нуклеозиды (VdU и VU) и нуклеотиды (VdUTP и VUTP) просто прекрасно подходят для пост-синтетической модификации нуклеиновых кислот с помощью iEDDA химии (реакции Дильса — Альдера), позволяя получить:
- Прекрасное восприятие клеточными ферментами
- Сборка практически нативных, но функционализированных структур нуклеиновых кислот
- Независимость по отношению к остальным клик-реакциям
- in vivo мечение при нетоксичных условиях
Схема 1: Винил-модифицированная уридин-производная для мечения нуклеиновых кислот in vitro и in vivo. При добавлении в среду культивирования, VdU легко проникает через клеточную мембрану и подвергается фосфорилированию с получением VdUTP. В процессе репликации VdUTP эффективно включается в ДНК клеточной ДНК полимеразой. Или же встраивание VdU может быть получено in vitro при удлинении праймера или ПЦР2,3.
Публикации:
[1] Rieder et al. (2014) Alkene-tetrazine ligation for imaging cellular DNA. Angew. Chem. Int. Ed. 53 (35):9168.
[2] Busskamp et al. (2014) Efficient labelling of enzymatically synthesized vinyl-modified DNA by an inverse-electron-demand Diels-Alder reaction. Chem. Commun. 50 (74):10827.
[3] Mačková et al. (2014) Polymerase synthesis of DNAs bearing vinyl groups in the major groove and their cleavage by restriction endonucleases. ChemBioChem. 15 (15):2306.
Информация представлена исключительно в ознакомительных целях и ни при каких условиях не является публичной офертой
