Наборы для выделения ДНК и РНК из различных материалов необходимы при широком спектре молекулярно-биологических методов, применяемых в исследовательских, диагностических, медицинских, биотехнологических и других областях. Процесс выделения нуклеиновых кислот заключается в получении чистого, свободного от примесей препарата ДНК или РНК, извлеченного из того или иного субстрата.

Представленные в этом разделе наборы - это отработанные и оптимизированные методики, представленные в виде специально подобранного комплекта реагентов для выделения ДНК и РНК из биологического материала - крови, растений, животных, плазмидной и геномной ДНК бактерий, очистки продукта ПЦР реакции, извлечения ДНК из агарозного геля и других задач, связанных с подготовкой препаратов нуклеиновых кислот.

Вы можете воспользоваться пошаговым подбором нужного набора для выделения ДНК или РНК (а также их очистки), либо перейти в подходящий раздел каталога по ссылкам ниже.




Существует большое количество методов выделения ДНК, предназначенных для различных задач в зависимости от субстрата, из которого должны быть выделены нуклеиновые кислоты, полноты извлечения из этого субстрата, степени очистки итогового препарата ДНК или РНК, характеристиками выделяемых молекул (размер, плазмидная или геномная и т.д.). Не последнюю роль при выборе метода могут сыграть технологические возможности лаборатории, необходимость в дополнительном лабораторном оборудовании, безопасность используемых реагентов для человека и окружающей среды.

Разработанные компанией Jena Bioscience технологии экстракции и очистки нуклеиновых кислот, представленные в нашем каталоге, сочетают высокое качество реагентов набора, оптимизированные методы и безопасность использования. В этих наборах не используются опасные для человека и окружающей среды реагенты - такие, как фенол и хлороформ.

Основные этапы выделения ДНК:

• Извлечение нуклеиновых кислот из содержащего их субстрата: разрушение и гомогенизация тканей, материалов, лизис клеток и т.д. Для этого используют лизирующие реагенты в сочетании с механическим воздействием – перемешиванием, перемалыванием, измельчением образца при помощи ультразвука.
• Удаление мембранных липидов с помощью детергентов и поверхностно-активных веществ, некоторые из которых задействованы и на предыдущем этапе.
• Удаление белков при помощи протеаз.
• Удаление молекул РНК при помощи РНКаз.
• Очистка ДНК от солей, белков, детергентов и других реагентов, задействованных на этапе клеточного лизиса. Наиболее распространенными являются процедуры:
  • Осаждение спиртом, как правило, сильно охлажденным этанолом или изопропанолом. Поскольку ДНК нерастворима в этих спиртах, она конденсируется, образуя осадок при центрифугировании. Степень осаждения ДНК улучшается при увеличении ионной силы раствора, для чего обычно используется ацетат натрия.
  • Фенол-хлороформная экстракция, при которой белки из образца денатурируют в присутствии фенола. После центрифугирования образца белки остаются в осадке, а раствор, содержащий нуклеиновые кислоты, смешивается с хлороформом, который удаляет остатки фенола из раствора (ДНК и РНК выделяются с использованием буферов с различным pH).
  • Связывание в колонках, которое использует способность нуклеиновых кислот в определенных условиях адсорбироваться на кремнезёме.

Особые методики выделения ДНК могут применяться для нестандартных образцов – таких, как археологические или криминалистические пробы, клетки, защищенные толстой клеточной стенкой (растительные клетки, дрожжи), образцов, содержащих ингибиторы.

Наборы для выделения ДНК (геномной) из биологических образцов

Выделение тотальной ДНК из биологических образцов является одной из часто встречающихся методических задач. Для ее решения прекрасно подойдут наборы для выделения ДНК в центрифужных колонках. Колонки представляют собой пробирки с силикагелевой мембраной, адсорбция на которой с последующей отмывкой оптимизированными буферами позволяет получить высокоочищенный препарат ДНК, свободный от ингибиторов и прочих нежелательных примесей. Для различных видов исходного материала подобраны подходящие лизирующие реагенты - например, в состав набора для выделения ДНК из дрожжей входит литиказа, а грам-отрицательных бактерий - лизоцим, что позволяет эффективно разрушать клеточные стенки этих организмов, способствуя высвобождению ДНК при лизисе.

Выделение в колонках, однако, имеет ограничение - этим методом сложно получить неповрежденные длинные молекулы ДНК, он рекомендуется для выделения молекул не более 50 тыс. пар нуклеотидов. Для анализа более крупных молекул подойдут наборы для выделения ДНК в растворе - более специализированные и сложные в использовании комплекты реагентов. Более мягкие условия выделения требуют больше времени, но позволяют получать препараты ДНК длиной до 150 тыс. пар нуклеотидов. Необходимость более тщательного подбора условий реакции обуславливает наличие специализированных наборов для работы с кровью, животными и растительными тканями.

Прочие наборы для выделения и очистки нуклеиновых кислот

• Выделение плазмидной ДНК из бактерий (PP-204/PP-211/PP-212: Fast-n-Easy Plasmid Mini/Midi/Maxi-Prep)
• Выделение тотальной РНК из биологического материала(PP-210)
• Выделение ДНК из продукта ПЦР реакции в колонках (PP-201)
• Выделение ДНК из агарозного геля в колонках (PP-202)
• Очистка РНК от геномной ДНК (PP-219)
• Ферментативная очистка продукта ПЦР реакции от праймеров и нуклеотидов (PP-218: SAP-Exo Kit)
• Ферментативная очистка от нуклеотидов и красителей (PP-216)